Contribution au développement d'un microsystème pour la séparation bidimensionnelle de protéines par électrophorèse - Archive ouverte HAL Access content directly
Theses Year : 2008

Contribution au développement d'un microsystème pour la séparation bidimensionnelle de protéines par électrophorèse

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Abstract

In the context of new food allergen detection, a microsystem dedicated to bidimensional electrophoretic protein separation has been developed, using isoelectric focusing (IEF) followed by zone electrophoresis (ZE). Both these separation modes have been investigated in capillary format before down-sizing the results obtained into microsystems. IEF protein separation has first been performed. The use of electrolytes consisting of narrow pH cuts of carrier ampholytes (NC) has proven to increase resolution. Microchip milk protein separation has then been performed. Glass and PDMS microchips and several surface treatments have thus been compared, in particular through electroosmotic flow measurements using an original method.Then, microchip ZE protein separation has been investigated. NC have again been used, due to their low conductivity. We found that they allowed decreasing protein adsorption Milk proteins have been separated within a few seconds after having optimized their derivatization with a fluorescent marker. Several microsystem schemes have then been considered to couple the two separation modes.
Dans le cadre de la détection de nouveaux allergènes alimentaires, un microsystème pour la séparation bidimensionnelle de protéines par électrophorèse a été développé, ces deux dimensions étant la focalisation isoélectrique (IEF) et l'électrophorèse de zone (EZ). Ces deux modes de séparation ont été étudiées au format capillaire avant d'utiliser les résultats obtenus en microsystèmes. La séparation de protéines par IEF a d'abord été réalisée. Nous avons montré que l'utilisation d'électrolytes constitués d'ampholytes d'intervalles étroits de pH (NC) permettait d'augmenter la résolution puis réalisé la séparation de protéines du lait en microsystèmes. Des microsystèmes en verre et en PDMS et plusieurs traitements de surface ont été comparés en utilisant une méthode de mesure de flux électroosmotique développée pour cela. Nous avons ensuite étudié la séparation de protéines par EZ en microsystèmes. Des NC ont de nouveau été utilisés, pour leur faible conductivité. Nous avons montré qu'ils permettaient de diminuer fortement l'adsorption des protéines puis nous avons réalisé la séparation de ces dernières en quelques secondes après avoir optimisé leur dérivation avec un marqueur fluorescent. Enfin, différents schémas de microsystèmes ont été envisagés pour coupler les deux dimensions de séparation.
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Dates and versions

pastel-00004227 , version 1 (10-10-2008)

Identifiers

  • HAL Id : pastel-00004227 , version 1

Cite

Martine Poitevin. Contribution au développement d'un microsystème pour la séparation bidimensionnelle de protéines par électrophorèse. Chimie. Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2008. Français. ⟨NNT : ⟩. ⟨pastel-00004227⟩
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