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Theses

Development of Top-Down Mass Spectrometry Approaches for the Analysis of Type IV Pili

Résumé : La caractérisation de protéines par spectrométrie de masse "top-down" (TDMS) possède plusieurs avantages sur l'approche "bottom-up" (BU), notamment pour la caractérisation des protéoformes; c'est-à-dire l'ensemble des protéines exprimées par la cellule, y compris celles portant les modifications post-traductionnelles (MPT). Dans cette thèse la TDMS a été développée pour l'analyse des pili de type IV (T4P) à la fois sur Orbitrap et sur FT-ICR. Les T4P sont des organelles extracellulaires composées principalement d'une protéine, la piline majeure, qui peut être fortement décorée par des MPT. Pour la piline majeure PilE, du pathogène humain Neisseria meningitidis (Nm), la TDMS a été optimisée pour obtenir la première caractérisation de toutes les protéoformes de PilE exprimées par une souche de référence et un rôle biologique a été proposé pour la MPT glycérophosphate. De plus la TDMS a été appliquée pour une étude à plus grande échelle des MPT des pili provenant des souches cliniques de Nm non-caractérisées. La comparaison des méthodologies TD et BU a révélé à la fois leur complémentarité et la faiblesse inhérente à l'approche BU pour la caractérisation complète de protéoformes. En combinaison avec d'autres techniques structurales, il a été montré que les pili exprimés par les souches de Nm de classe II sont fortement glycosylés, que la glycosylation est dirigée par la séquence de PilE, et que ces sucres modifient fortement la surface des fibres de pili. Ces observations ont amené à une hypothèse nouvelle sur le mécanisme d'évasion immunologique des T4P de classe II chez Nm. De plus la première caractérisation d'une T4P exprimée par une bactérie Gram positif a été réalisée.
Document type :
Theses
Complete list of metadatas

https://pastel.archives-ouvertes.fr/pastel-00987029
Contributor : Joseph Gault <>
Submitted on : Monday, May 5, 2014 - 12:17:10 PM
Last modification on : Monday, January 13, 2020 - 5:08:16 PM
Document(s) archivé(s) le : Monday, April 10, 2017 - 7:09:14 PM

Identifiers

  • HAL Id : pastel-00987029, version 1

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Citation

Joseph Gault. Development of Top-Down Mass Spectrometry Approaches for the Analysis of Type IV Pili. Analytical chemistry. Ecole Polytechnique X, 2013. English. ⟨pastel-00987029⟩

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