Etude des erreurs programm?es du ribosome par microscopie de fluorescence en mol?cule unique

Nathalie Barbier 1
1 Laboratoire Charles Fabry / Biophotonique
LCF - Laboratoire Charles Fabry
Résumé : La synth?se des prot?ines est un m?canisme central de la vie cellulaire dont la compr?-hension est un enjeu pour la recherche biom?dicale. Des ph?nom?nes comme les erreurs programm?esde la traduction eucaryote ou l?initiation par des structures IRES virales sont impliqu?s dans les processusde r?plication de virus et de bact?ries. Mieux appr?hender ces processus est une ?tape essentiellepour aboutir au d?veloppement d?approches th?rapeutiques innovantes. Les ?tudes en mol?cule uniquepermettent d?observer chaque syst?me r?actionnel individuellement et donnent acc?s ? des ?v?nementsasynchrones difficilement observables en mesure d?ensemble, tels la traduction de prot?ines.Ce manuscrit de th?se pr?sente une approche d??tude de la traduction par un ribosome eucaryote(mammif?re) en mol?cule unique. Nous observons les syst?mes traductionnels gr?ce ? des marqueursfluorescents li?s ? des oligonucl?otides pouvant s?hybrider sur les s?quences d?ARN messagers traduites.L?observation de ces marqueurs est faite par microscopie de fluorescence en r?flexion totale (TIRFM),les ARNm ?tant accroch?s ? la surface de l??chantillon. En lisant l?ARNm, le ribosome d?tache lesmarqueurs, et leurs instants de d?part nous permettent de remonter ? la dynamique de traductionde ribosomes individuels. Cette m?thode permet d?obtenir des donn?es cin?tiques statistiques surun grand nombre de syst?mes traductionnels en parall?le pouvant alors ?tre ajust?es par des lois deprobabilit?. Partant de ce principe, mes travaux de th?se ont eu pour objectif d??tendre nos exp?riences? une nouvelle probl?matique biologique : l??tude des ?v?nements non canoniques de la traductioneucaryote. Pour cela nous avons apport? les modifications et les optimisations n?cessaires au dispositifet au protocole exp?rimental pour l?adapter ? ces nouveaux enjeux.Nos mesures de la cin?tique in vitro de l??longation eucaryote ont mis ? jour un d?lai d? ? uneinitiation non-canonique. En effet, nous r?alisons le recrutement du ribosome par l?ARNm gr?ce ?une structure virale de type IRES. Dans nos conditions d?exp?rience, l?incorporation d?un acide amin?prend environ une seconde tandis que cette structure induit un retard ? la traduction de plusieursdizaines de secondes. Nous avons r?alis? une ?tude comparative de plusieurs de ces structures viraleset avons montr? que le d?lai mesur? ?tait une caract?risitique conserv?e dans le cadre de l?initiation noncanonique. Ce r?sultat ouvre des perspectives d??tudes cin?tiques tant pour approfondir nos conclusionssur les IRES que pour aborder d?autres ?v?nements non canoniques tel que le d?calage de la phase delecture ou le franchissement du codon stop.
Type de document :
Thèse
Optique [physics.optics]. Université Paris-Saclay, 2017. Français. 〈NNT : 2017SACLO005〉
Liste complète des métadonnées

Littérature citée [132 références]  Voir  Masquer  Télécharger

https://pastel.archives-ouvertes.fr/tel-01654479
Contributeur : Abes Star <>
Soumis le : lundi 4 décembre 2017 - 09:12:32
Dernière modification le : mardi 13 novembre 2018 - 15:25:43

Fichier

75623_BARBIER_2017_archivage.p...
Version validée par le jury (STAR)

Identifiants

  • HAL Id : tel-01654479, version 1

Citation

Nathalie Barbier. Etude des erreurs programm?es du ribosome par microscopie de fluorescence en mol?cule unique. Optique [physics.optics]. Université Paris-Saclay, 2017. Français. 〈NNT : 2017SACLO005〉. 〈tel-01654479〉

Partager

Métriques

Consultations de la notice

324

Téléchargements de fichiers

98